无甘油 T4 DNA 连接酶
无甘油T4 DNA连接酶(HC)是一种无甘油的高浓度酶(50 U/μL)，可催化双链DNA或RNA中相邻的5 ’磷酸基和3 ’羟基之间形成磷酸二酯键，能有效地连接钝端 或黏性末端，并修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交链中的单链缺口。
Lyophilized Glycerol-free T4 DNA Ligase (HC) maintains its activity
Stability of Glycerol-free T4 DNA Ligase (HC) at room temperature in liquid or lyophilized format. For each condition, 330 units of T4 DNA Ligase was assessed for its ability to ligate 750 ng HindIII digested λ DNA in a standard ligation reaction for 1 hour at RT which was subsequently run on an agarose gel. ImageJ analysis was used to assess ligation efficiency relative to T4 DNA Ligase (T0). The results demonstrate that Glycerol-free T4 DNA Ligase (HC) is not affected by lyophilization and retains its activity when rehydrated.
Glycerol-free T4 DNA Ligase (HC), MDX200
Available in 1,000 Unit or 10,000 Unit aliquots
Lyo-Ready T4 Ligase Buffer, 5x, MDX204
Available in 1 mL or 10 mL aliquots
产品资料
无甘油 T4 DNA 连接酶无甘油 T4 DNA 连接酶
Pfu高保真热启动聚合酶Pfu高保真热启动聚合酶
常见问答: Glycerol-free T4 DNA Ligase (HC)
T4 DNA连接酶用于链接黏性末端(室温下反应10分钟)或钝端(室温下反应2小时)。建议使用高浓度DNA连接酶链接单碱基悬垂端。
一个Weiss Unit定义为在37°C下，使用指定的反应条件，在20分钟内将1 nmol的32p标记的无机焦磷酸盐转化为Norit可吸附材料(活性炭)所需的酶量(Weiss, B., et al., J. Biol. Chem., 243, 4543 (1968))。
Weiss Unit不是DNA连接的直接测量，而是酶腺苷化反应的间接测量，然后确定ATP-PPi交换。 粘性末端单位（CEU）也可以作为定义连接酶的单位，这是DNA连接的直接测量。1个CEU定义为在20µL的1X T4 DNA连接酶缓冲液中在16°C下30分钟内给予50%的lambda DNA Hind III酶切片段连接所需的酶量。1 CEU=0.015 Weiss Unit, 或者1 Weiss Unit=67 CEU。
可以的， 65 °C加热10分钟可使其失活。
一般1x链接反应缓冲液中包含： 50 mM Tris-HCl (pH 7.8), 10 mM MgCl2, 10 mM DTT 和10 mM ATP。镁离子和ATP是反应必须的辅酶，每形成一个磷酸二酯键就要消耗两个ATP分子。
Both Mg and ATP are an essential cofactor for the reaction, two ATP molecules are consumed for each phosphodiester bond formed.
高浓度T4 DNA连接酶（HC）有益于在反应体积有限的条件下使用，例如微流控和POC卡壳中。
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