文库定量试剂盒性能
用提供的引物一式三份，对六种浓度的DNA标准品（蓝色）中的进行qPCR扩增，并对稀释的Illumina NGS文库（红色）进行十倍梯度稀释，然后根据所得的标准曲线确定经大小调节的文库浓度。扩增图显示检测极限为0.0001pM（100aM）。
产品描述
对加载到测序流动池上的文库分子进行准确定量是NGS工作流程中获得高质量读取数据的最关键步骤之一。装载不足量的文库DNA将导致低簇密度和降低测序产率。过多的文库DNA可能会增加聚类密度，并导致数据质量差。通过电泳或分光光度法进行NGS文库定量的标准方法灵敏度低，对适配体结合的DNA具有非特异性，通常需要大量文库样品进行分析。
qPCR具有更高的灵敏度和更宽的动态范围，被视为NGS文库定量的金标准，因为它可以准确地对文库分子数进行定量，即使是对浓度非常低的文库。
产品介绍
| 描述 | 基于Illumina的NGS文库的快速和稳健定量。它由基于SYBR®的快速qPCR混合物、预稀释的DNA标准品、引物混合物和稀释缓冲液组成，旨在在装载到流动池中之前准确测量可扩增DNA片段的数量。 |
| 浓度 | 2x |
| 外观 | 透明液体 |
| 热启动 | 抗体 |
| 应用 | qPCR, 两步法RT-qPCR |
| 样本类型 | cDNA, DNA |
| 产品样式 | 3管 |
| 储存 | -20 °C |
| 稳定性 | 参见产品标签 |
| 一致性 | 测试样品和参考样品之间的±0.5 Ct差异 |
| DNA 污染 | 在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异靶标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。 |
| DNA酶/RNA酶污染 | 没有可检测到的降解 |
产品资料
无甘油 T4 DNA 连接酶（HC）无甘油 T4 DNA 连接酶（HC）
High-Specificity Pfu HS CatalogHigh-Specificity Pfu HS Catalog
下一代测序
Next Generation Sequencing (NGS)
建库分子酶下一代测序
Next Generation Sequencing (NGS)
建库分子酶
常见问答: NGS 文库定量试剂盒
qPCR具有更高的灵敏度和更宽的动态范围，被视为NGS文库定量的金标准，因为它可准确地对文库分子定量，即使是浓度较低的文库。
NGS文库定量试剂盒是一种优化、稳健的qPCR试剂盒，包含预稀释的标准品，以最大限度地减少移液误差，以及预合格的P5和P7 Illumina适配器序列引物混合物，以确保可重复和精确的qPCR结果，以及用于稀释NGS文库样品的优化缓冲液。
不可以死，因为文库定量试剂盒含有针对Illumina测序平台特异的P5和P7适配子序列兼容的引物。
是的，在运行qPCR之前，必须对准备好的文库进行稀释。通常建议使用提供的稀释缓冲液制备1:10000、1:100000和1:1000000稀释的文库样品。使用两种或多种不同稀释度的文库可确保至少一种稀释度落在生成的标准曲线的动态范围内。当文库浓度高时，这可能特别有用。
Qubit、分光光度计和生物分析仪等仪器测量溶液中存在的DNA总量。文库定量试剂盒将仅在两种适配器都存在的情况下对分子进行定量。如果qPCR测量的浓度明显低于其他方法测量的浓度，这表明在衔接子连接过程中只有一小部分分子正确地结合了衔接子。
是的，始终建议运行一式三份的qPCR，因为qPCR是一种极其敏感检测技术，很容易受到液体处理、仪器执行和采样错误引起的变化的影响。
是的，对试剂盒中使用的插入染料与每个双链DNA产物的碱基对数量成比例地结合DNA，因此有必要通过标准化到DNA标准的大小342bp来校正产物长度，具体校正公式可以参考产品指南。
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