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Air-Dryable Direct DNA and RNA/DNA qPCR Urine

Air-Dryable 可风干尿液直扩 qPCR /RT-qPCR 预混液是不含甘油、含有优化的风干赋形剂、可兼容风干的核酸检测试剂,适用于从尿液样本免核酸提取的DNA 和RNA直接扩增。

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Air-Dryable Direct DNA qPCR Urine, MDX150

Available in 5 mL (1,000 Rxns) or 50 mL (10,000 Rxns) aliquots

Air-Dryable Direct RNA/DNA qPCR Urine, MDX151

Available in 5 mL (1,000 Rxns) or 50 mL (10,000 Rxns) aliquots

尿液是一种理想的临床诊断样本,因为其具有排泄量大、无创性、可自行取样、并且可重复取样等特点。 尿液样本目前已被广泛用于诊断和治疗传染病(包括性病)、激素和代谢紊乱、肾脏疾病、膀胱癌、尿路感染(UTIs)以及毒品检测。 然而,尿液中含有尿素和核酸酶等物质,可以破坏DNA或抑制PCR反应,而且许多疾病标志物仅在低浓度尿液中存在,这些对以尿液为样本的分子检测是个挑战。 迈迪安推出的Air-Dryable™ 可风干尿液直扩qPCR/RT- qPCR预混液是专门为直接从高浓度尿液中快速灵敏地扩增DNA/ RNA设计的抗抑性配方,其高灵敏度甚至可以检测出通常需要验血才能检测到的虫媒病毒,如基孔肯雅病毒。该试剂含有优化的缓冲液体系、风干辅料和稳定剂,可通过烘箱干燥用于开发常温稳定的检测。使用时只需要将引物和探针添加到可风干预混液中,再分装到反应容器中(例如:PCR管)进行干燥即可(请参考产品操作指南及常见问答中的建议优化干燥条件设置)。检测时,只需要将患者尿液样本直接加入干燥后的预混液中,无需核酸提取即可进行检测。

常见问答: 开发风干分子检测的重要基本原理

风干是通过蒸发过程移除反应液体中的水分。该过程需要使用精密的烘箱, 通过优化的干燥温度和时间来实现充分干燥。不同的反应预混液有不同的理想失水率,当失水率达到这个水平,表明干燥完成。 在相应的产品操作指南中我们推荐了对应的烘箱温度和干燥时间。但值得指出的是,许多因素会影响风干过程,如反应容器、反应液体积、风干批次的大小和预混液的最终配方(例如,是否添加了引物探针和添加了多少体积的引物探针),因此需要根据具体情况进行风干优化。

可以的, 我们建议根据不同的反应配方(比如说风干反应液是否含有引物探针,以及添加引物探针的体积)、使用的反应容器(孔板或试管)、风干批次大小等因素,优化烘箱温度和干燥时间。高温有可能会影响反应液及其组分的完整性,包括酶的活性。

理想情况下,风干MDX095 可风干一步法RT-qPCR预混液应移除70%的水分(仅对预混液进行风干时, 风干MDX082可风干qPCR预混液应移除95%的水分(仅对预混液进行风干时)。因此,每个检测反应需要优化风干设置来达到这个数值。如果水分残留过多可能会影响风干试剂的保质期,而过度干燥可能会使风干混合物很难复溶,因此导致性能下降。 失水率可以通过对比风干前后含有预混液的反应管重量来计算 (请参阅基本流程进一步了解相关信息)。此外,风干后必须要立即封装风干混合物。

风干试剂在添加样本后可在秒内迅速复溶。 建议加入样本后轻晃或震荡反应管使反应液充分混匀。

如果反应液被过度干燥,会导致酶的性能受到影响。理想的风干状态应该是达到建议的失水率,酶的性能依然不受影响。 如果风干试剂的Ct值延迟,这通常表明试剂被过度风干,干燥过程需要优化。

我们没有发现使用不同荧光探针 (Cy5, FAM, JOE 或ROX) 对风干试剂的性能产生影响。

我们在风干过程中没有观察到任何污染,但是强烈建议遵守良好的实验室清洁规范以减少可能的环境污染。例如,保持操作表面清洁、将做风干干燥、qPCR反应配置和数据分析的区域分开。此外,建议遵照制造商提供的说明维护清洁烘干箱。在干燥过程中,风扇产生的空气流动是否会将少量引物/探针从一个

我们没有观察到任何由空气流动造成风干过程中的交叉污染。风干混合物在试管底部,反应管之间发生交叉污染的可能性极小。此外,出于GMP规范原则,不建议将不同测试的反应液在同一烘干过程中同时进行干燥。

也可以使用其他反应容器,如板孔、小瓶或各种微芯片,但不同反应容器或检测的干燥条件需要优化。确定最佳干燥条件和参数后,需要进行验证,包括扩大生产规模。

我们建议使用精密烘箱(温度均匀性+/- 1.5°C),可以有鼓风或真空的功能。 在我们的测试中,使用了Memmerd UF260 Plus烤箱,风扇和风门的设置分别为100%和20%。请注意,不同的烘箱有不同的规格和可调参数,需要根据具体检测、风干液体积、反应容器类型、风干批次大小、相对湿度和海拔高度进行优化。

如果首次风干失败,没有达到正确的失水率,我们不建议把试管再放回烘箱继续风干或者加水延长风干。为了保证风干参数可控性和检测的可重复性,建议重新配置风干。除此之外,在风干完成前不建议在风干过程中打开烘箱门,因为会影响烘箱中温度等环境。

风干与冻干不同,因此失水率不会受环境影响。

当体系中引入任何变量时,如反应体积、反应容器、引物/探针或批次大小,我们建议分开测试。这将确保条件的可控性和结果的可复制性。

不。天平不需要靠近烤箱,只要盖上管盖,然后用天平测量即可,即使天平摆在另一个房间也可以。  

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